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            淺析核酸檢測PCR試劑盒的作用與意義所在

            瀏覽次數:25發布日期:2022-08-15
              核酸檢測PCR試劑盒和紫外凝膠成像系統(紫外分析儀或手提紫外等)以及移液器都可能影響PCR檢測的質量。PCR儀是控制PCR反應溫度變化的,其溫度和控制時間的準確程度可能會影性PCR檢測質量。移液器取液的準確程度影響反應體系是否能達到反應環境。紫外分析系統對檢測敏感性有明顯的影響。紫外分析系統有3種類型儀器:紫外分析儀、紫外凝膠成像系統、手提紫外燈。紫外分析儀直接用眼睛觀察瓊脂糖凝膠上DNA擴增帶。
             
              紫外凝膠成像系統是在計算機上通過攝像系統對瓊脂糖凝膠上DNA擴增帶進行觀察。手提紫外燈可以在電泳過程中直接對瓊脂糖凝膠上DNA擴增帶進行觀察,使用方便,分辨率比較低。依據這些儀器的分辨率由高到低順序是紫外分析儀、紫外凝膠成像系統、手提紫外燈。紫外分析儀有時能看到弱陽性擴增帶,在紫外凝膠成像系統上卻看不到。手提紫外燈只有在陽性擴增帶比較亮時才能看到,建議為保證檢測質量建議不用手提紫外燈,可用于臨時的電泳結果觀察。
             
              核酸檢測PCR試劑盒適用于以RNA為模板合成cDNA的反轉錄,以及后續的PCR擴增實驗。選用優異的M-MLVRT酶,可以合成大于5kb的cDNA;反轉錄過程中的特異的RNase抑制劑可有效降低由于外源RNase污染而導致實驗失敗的風險。本試劑盒使用方便、快捷,可廣泛用于cDNA克隆及目的基因檢測等分子生物實驗。
             
              測定RNA濃度按以下步驟進行操作:
             
              (1)取1u1RNA原液,放在0.5mlEP管中,加入249u1ddH20,用移液槍反復混勻。
             
              (2)用ddH20為空白對照,調節A260零點。
             
              (3)倒掉比色杯中的水,加入稀釋并混合均勻的RNA樣液,測定A260值。倒掉比色杯中的RNA樣液,用ddH20沖洗比色杯,再調節A280零點。
             
              (4)倒掉比色杯中的水,加入稀釋并混合均勻的RNA樣液,測定A280值。計算A260/A280比值,比值≥1.8,滿足實驗要求。
             
              (5)RNA原液濃度=A260×稀釋倍數×40(ng/u1)。
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